产品货号：
BTN14-32000
中文名称：
血吸虫荧光定量PCR试剂盒(染料法)
英文名称：
Schistosoma spp. qPCR Kit(SYBR)
产品规格：
50次
发货周期：
1～3天
产品价格：
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本产品是以染料法荧光定量PCR技术为基础开发的专门检测血吸虫通用的试剂盒。
血吸虫通用(Schistosoma spp.)会引起血吸虫病，该病主要通过皮肤，黏膜与疫水接触受染。患病后，侵袭期患者可有咳嗽、胸痛、偶见痰中带血丝等症状，急性期临床上常会出现发热、痢疾样大便且带血和黏液、肝脾大、咳嗽、胸痛，血痰等症状，慢性期多因急性期未曾发现，未治疗或治疗不彻底，或多次少量重复感染等原因，逐渐发展而成，晚期病人极度消瘦，出现腹水、巨脾，腹壁静脉怒张等晚期严重症状。感染该病对人体健康造成严重损害，因此快速检测血吸虫通用具有重要意义。
保存：-20℃，有效期一年。
一、制备标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
二、样品DNA的制备
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
四、数据处理
五电泳检测：
相关搜索：血吸虫荧光定量PCR试剂盒(染料法)，Schistosoma spp. qPCR Kit(SYBR)
血吸虫通用(Schistosoma spp.)会引起血吸虫病，该病主要通过皮肤，黏膜与疫水接触受染。患病后，侵袭期患者可有咳嗽、胸痛、偶见痰中带血丝等症状，急性期临床上常会出现发热、痢疾样大便且带血和黏液、肝脾大、咳嗽、胸痛，血痰等症状，慢性期多因急性期未曾发现，未治疗或治疗不彻底，或多次少量重复感染等原因，逐渐发展而成，晚期病人极度消瘦，出现腹水、巨脾，腹壁静脉怒张等晚期严重症状。感染该病对人体健康造成严重损害，因此快速检测血吸虫通用具有重要意义。
- 即开即用，用户只需要提供DNA模板。
- 特异性高，引物是根据人血吸虫通用高度保守区设计，不会扩增其他细菌和微生物。
- 引物和扩增体系经过优化，灵敏性比常规PCR高100倍。
- 提供无传染性的PCR阳性对照，便于区分假阴性样品。
- 一管式操作，荧光PCR检测，不容易产生环境污染。
- 本产品只能用于科研，本试剂盒足够50次20μL体系的PCR。
| 组分 | 规格 |
| 2×qPCR MagicMix | 0.5mL |
| 荧光PCR专用模板稀释液 | 1mL |
| 血吸虫通用PCR引物 | 100μL |
| 血吸虫通用阳性对照(1×108拷贝/μL) | 50μL |
保存：-20℃，有效期一年。
一、制备标准曲线样品(以102～107拷贝/μL这6个10倍稀释度为例)由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分)。为增加产品稳定性和避免扩散传染性病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供无传染性的DNA片段作为阳性对照。
- 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。
- 用带芯枪头分别加入45μL荧光PCR专用模板稀释液，最好用带芯枪头，下同)。
- 在7号管中加入5μL阳性对照(其浓度为1×108拷贝/μL，试剂盒提供)，充分震荡1分钟，得1×107拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在6号管中加入5μL 1×107拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×106拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 换枪头，在5号管中加入5μL 1×106拷贝/μL的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×105拷贝/μL的标准曲线样品。放冰上待用。
- 重复上面的操作直到得到6个稀释度的标准曲线样品。放冰上待用。
二、样品DNA的制备
- 用自选方法纯化样品的DNA，本产品跟市场上绝大多数核酸纯化产品兼容。
- 如果有N个样品，则需要进行N+2个样品提取，多出的一个用作样品制备阳性对照管、另一个用作样品制备阴性对照管。如果用本试剂盒自带的DNA释放剂试用装。则按下面步骤操作：
- 配制溶液A工作液。以配制1mL工作液(足够10个样品)为例：在一干净塑料管中加入10μL溶液A成分一，20μL溶液A成分二和970μL超纯水，充分混合均匀即可。溶液A工作液可室温放置，但最好在一周内用完，不要长期放置。一次检测一个样品需要100μL溶液A工作液，1mL工作液足够10个样品。如果待测样品数量为其他数字，配制的溶液A工作液的体积需要做相应的调整。
- 在标记好的N+2个离心管中，加入1～5mg(半粒芝麻大小)固体待测样品或5μL液体待测样品。在样品制备阳性对照中加入5μL阳性对照，在样品制备阴性对照中加入5μL水。
- 在每个管中加入100μL溶液A工作液，确保固体样品被溶液淹埋，如果是液体样品则震荡混匀。
- 95℃保温10分钟。
- 待冷却到常温后加入10μL溶液B并混匀得DNA释放液。每个样品得到的DNA释放液足够进行50-100次PCR。
三、设置qPCR反应(20μL体系，在样品制备室进行)
- 如果只做1次重复，则标记N+9个PCR管，其中N+2个用于上步得到的N+2个样品，1个用于PCR阴性对照，6个用于标准曲线样品。如果做2～3次重复，则反应设置数量相应增加2或3倍。
- 在标记管中按下表加入各成分(本表只列出一次重复。样品管和阴性对照设置完毕后才设置阳性对照，并且阳性对照样品要等所有管子盖上盖子储存好后最后加)：
注：仅ABI7500、7700和7900仪器需要使用ROX作为对照，其他荧光PCR仪器(如iCycler IQ、MJ Option、MJ Chromo4、MX3000、MX4000、RotorGene3000、RotorGene 6000和LightCycler480)不需要使用ROX，则用水替代。成分 样品管
N+2个PCR阴性
对照管曲线样品管
(2～7管)2×qPCR MagicMix 10μL 10μL 各10μL 血吸虫通用PCR引物混合液 2μL 2μL 各2μL 自备10×ROX(见注) 2μL 2μL 各2μL 待测样品DNA模板 6μL 不加 不加 第7步所得标准曲线样品稀释液(2～7号) 不加 不加 各6μL - 盖上盖子后上机，按下面参数进行PCR(具体PCR参数可以根据仪器不同而自行优化)。
过程 温度 时间 预变性 94℃ 5min PCR反应
(35个循环)94℃ 0.5min 50℃ 0.5min(采集SYBR通道的荧光信号) 72℃ 0.5min 最后延伸 72℃ 10min
四、数据处理
- 设定60℃～96℃范围的融解曲线分析，排除假阳性。
- 如果把本试剂盒用于定量检测，则以阳性对照浓度的log值为横轴，以Ct值为纵轴，绘制标准曲线。再以待测样品的Ct值从标准曲线上推算出样品DNA浓度的log值，再推算出其浓度。
- 如果把本试剂盒用于定性检测，只判断阳性或阴性，则阴性对照Ct必须大于或等于40。阳性对照必须有荧光对数增长，有典型扩增曲线，Ct值应该小于或等于30。对待测样品，如果其Ct大于或等于40则为阴性，如果小于或等于35则为阳性。如果在35～40之间，则重复一次。重复实验的Ct值如果大于或等于40则为阴性，如果小于40，则为阳性。
五电泳检测：
- 如果有必要电泳确认，可取10～20μL PCR产物直接在琼脂糖凝胶上电泳产物的大小为400bp。
相关搜索：血吸虫荧光定量PCR试剂盒(染料法)，Schistosoma spp. qPCR Kit(SYBR)